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自发性红斑狼疮小鼠模型 诱导性红斑狼疮小鼠模型

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MD056 收藏

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武汉华联科生物技术有限公司 进入店铺

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湖北省-武汉市-洪山区

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实验动物信息

动物模型名称:

自发性红斑狼疮小鼠模型

动物的种属、品系:

SPF级MRL/lpr小鼠

动物性别:

雄性

动物年龄:

       8-10周

动物体重:

         30-50g


动物模型名称:

诱导性红斑狼疮小鼠模型

动物的种属、品系:

BALB/c小鼠

动物性别:

雄性

动物年龄:

       6-7周

动物体重:

        18-20g



实验内容

1.染色质制备:颈椎脱臼处死BALB/c小鼠,无菌取脾脏,于DMEM-20%小牛血清中制备细胞悬液,台盼蓝计数,加入培养瓶中,使其终浓度为ConA  3mg/L,细胞 2×109/L  20ml直立培养,于37℃,5%CO2培养箱中培养48h后取出,倒置显微镜下可见ConA 活化瓶中一个视野由5个以上大成团细胞(未加入ConA瓶基本无成团细胞),离心收集活化脾细胞,使用改良Chiu法提取染色质,-20℃冻干备用。

2.造模方法:将活性染色质100g(0.2m)分别于d0d14d21d28尾根部及背部皮内注射模型组小鼠。首次免疫将染色质干粉和生理盐水及BCG制备混悬液,将该悬液逐滴加人搅拌中的等体积弗氏不完全佐剂(ICFA),4℃搅拌12h制成油包水乳剂,BCG终浓度为10g·L:d14以染色质和CFA兔疫但不含BCG,d21d28以染色质混悬液再次免疫。

3.一般观察:动物一般体征观察及尿蛋白的测定观察并记录动物遺模后行为活动、毛发状态、排泄物等体征异常变化。d28开始,采用目测半定量尿蛋白试纸每周检测动物尿蛋白水平。体重测定每周定期称量动物体重1

4.取样观察:肾脏和脾脏组织病理学检测d84放血处死小鼠,肾、脾脏,置于含10%甲醛溶液固定,石蜡包埋HE染色微镜观察各组织病理学改变情况。

5.胸腺指数和脾脏指数:测定d84称量小鼠体重,血处死小鼠,剥离胸腺和脾脏,分别称重,以每100g动物体重的胸腺和脾脏重量作为动物的相应胸腺指数和脾脏指数19conAIPS。

6.诱导的TB淋巴细胞增殖反应测定:采用MTT法进行检测。

7.血清中肌酐和尿素氮的测定:处死小鼠,分离动物血,全自动生化分析仪检测血清照酐(Crea)和尿素氮(BN)水。

8.血清中ANA、抗dDNAIgG1IgG2aU-10IFNY水平测定:分离血清,采用EIA法检测,严格按照试剂盒说明书进行操作。

9.脾脏TB淋巴细胞亚群测定:处死动物,取脾脏,规制备脾细胞悬液调细胞浓度为10·L,分别加入10μCD19PE/CD21-FTCCD23-FIrCCD27-FC,IgD-FCIgM-FTTCCD4FIrC/CD25PE标记抗体,4℃避光放20mn,用流式细胞仪检测CD9CD19CD21,CD19CD23CD19Cm27CD19IgDCD191gM·B淋巴细胞CD4CD25·T淋巴细胞百分比。

平台实验内容配图.png

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